ELISA實(shí)驗(yàn)中為什么要洗滌?這一步驟有那么重要嗎?
洗滌雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
重點(diǎn)分析:ELISA試劑盒洗滌的兩大方法
一、浸泡式
1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
2.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
5.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
二、流水沖洗式
初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續(xù)沖洗 2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。